深芬儀器CSY-E96D非洲豬瘟檢測(cè)方法非洲豬瘟快速檢測(cè)儀

• 實(shí)驗(yàn)所需自備試驗(yàn)器材*
• 檢測(cè)儀（450nm）
• 高精度加樣器及槍頭：10-200ul    1000-5000ul
• 37℃恒溫箱或水浴鍋
• 蒸餾水或去離子水

試劑盒組成：

非洲豬瘟快速檢測(cè)儀試劑準(zhǔn)備

1. 請(qǐng)?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒，平衡至室溫。

• 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶，屬于正常現(xiàn)象；放置室溫，輕搖均勻，待結(jié)晶*溶解后再配置洗滌液?？蓪?0ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml工作濃度的洗滌液，未用完的放回4℃
• 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

非洲豬瘟快速檢測(cè)儀試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被非洲豬瘟抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗原，經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），與CUT OFF值相比較，從而判定標(biāo)本中非洲豬瘟（ASF）的存在與否。

非洲豬瘟快速檢測(cè)儀前處理方法

1：血清：使用不含熱源和內(nèi)素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞小心地分離

方法2：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉或甘素抗凝，離心30分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。

3. 尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

4. 細(xì)胞上清液：3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

5. 組織標(biāo)本：將組織加入適量生理鹽搗碎，3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清液

6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

非洲豬瘟快速檢測(cè)儀CSY-E96D非洲豬瘟檢測(cè)方法czcz作步驟：

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔，陰、陽(yáng)性對(duì)照孔中加入陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照各50μL；

3.  待測(cè)樣本孔加待測(cè)樣本10μL，在加樣本稀釋液40μL；

4.  隨后陰、陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗原100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光水浴鍋孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

李丹q 2072559023**3122752409